تبلیغات
دانلود فایل های کارشناسی ارشد - پایان نامه تولید نوروسفر از سلول­های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان

امروز:

پایان نامه تولید نوروسفر از سلول­های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان

تولید نوروسفر از سلول­های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان


هدف : هدف ما در این پژوهش پاسخ به این سوال است که  آیا MSCs  بعد از کشت طولانی مدت می­توانند به طورخود­بخودی به سلول­های پیش­ساز عصبی تمایز یابند.

مواد وروش­ها: این تحقیق شامل دو گروه می­باشد: کشت پاساژ پنجم MSCs  در محیط کشت -MEMα و  FBS %10  به مدت سه هفته بدون تعویض محیط یا استفاده از  القاگر به عنوان گروه آزمایشی و پاساژ پنجم MSCs بدون کشت طولانی مدت به عنوان گروه کنترل. سپس هر گروه توسط واکنش زنجیره­­ای پلیمراز(RT- PCR) به منظور بیان ژن­های فاکتور­های نوروتروفیک ( NGF، BDNF، NT3، NT4/5و GDNF) و ژن­های نورونی (Nestin،TH  وNurr1) ارزیابی شد. در این مطالعه، از ایمینوسیتوشیمی Nestin و βІІІ-tubulin  به منظور تعیین سلول­هایی که این نشانگر­ها را بیان می­کنند استفاده شد.

نتایج: پاساژ پنجم MSCs که از موش صحرایی بالغ استخراج شدند، بعد از کشت طولانی مدت (سه هفته) قادرند بطور خودبخودی به سلول­های شبه نوروسفری تمایز یابند و به نشانگر نستین پاسخ مثبت می­دهند. بعد از هفته دوم کشت، سلول­های شبه نورونی به نشانگر  βІІІ-tubulin واکنش مثبت نشان دادند. بررسی­های آماری نشان داده است که  MSCs در گروه آزمایشی افزایش معنی­داری از ژن­های فاکتور­های نوروتروفیک  NGF و  GDNFو ژن­های نورونی  Nestinو Nurr1 را نسبت به گروه کنترل نشان دادند    .(p<0.05)

نتیجه گیری:  در این مطالعه نشان داده شد که MSCs در کشت طولانی مدت، به طورخودبخودی به نوروسفر تمایز پیدا می­کنند بدون اینکه با فاکتور رشد یا القا­کننده خاص همراه شوند و قادرند ژن­های اختصاصی نورون­های دوپامینرژیک مانند  THو Nurr1را بیان کنند. مطالعات ما نشان می­دهد که  MSCsدر شرایط کشت طولانی مدت توانایی تمایز به سلول­های نورونی را به طور خودبخودی دارا هستند و پیشنهاد می­شود منبع سلولی مناسبی در درمان بیماری­های نورولوژیکی باشند.

کلید واژگان: سلول­های بنیادی مزانشیمی مغز استخوان،کشت طولانی مدت، تمایز خودبخودی، نوروسفر

 

فهرست مطالب

 

 

عنوان صفحه

فصل اول: مقدمه. 1

مقدمه و مروری بر مطالعات گذشته. 1

1-1 سلول­های بنیادی جنینی.. 3

1-2 سلول­های بنیادی بالغ. 4

1-3 سلول­های بنیادی مغز استخوان. 5

1-3-1 مارکرهای سطحی خاص سلول­های بنیادی مزانشیمی.. 8

1-3-2 تنظیم سیستم ایمنی توسط سلول­های بنیادی مزانشیمی.. 8

1-3-3 پتانسیل تمایزی سلول­های بنیادی مزانشیمی.. 10

1-4 کاربرد درمانی سلول­های بنیادی مزانشیمی.. 14

1-5 انواع فاکتورهای رشد عصبی (NTFs) و ساختمان مولکولی گیرنده­های مربوط به آن­ها 17

1-5-1 فاکتورهای نوروتروفیک… 17

1-5-1-1 انواع فاکتور­های نوروتروفیک… 18

1-5-2 گیرنده­های مربوط به فاکتورهای رشد عصبی.. 20

1-5-2-1 ساختار گیرنده P75NTR و اتصال نوروتروفین.. 20

1-5-2-2 ساختار گیرنده Trk و اتصال نوروتروفین.. 22

1-6 سلول­های بنیادی عصبی.. 25

1-6-1 نوروسفر. 25

1-6-1-1 نوروسفر منبعی برای سلول درمانی.. 31

1-7 ضرورت اهداف تحقیق.. 33

فصل دوم: مواد و روش­ها. 35

2-2 تهیه و نگهداری حیوان آزمایشگاهی.. 36

2-2 جداسازی و کشت سلول­های بنیادی مغز استخوان موش صحرایی بالغ. 36

2-2-1 طرز تهیه محیط کشت    a-MEM.. 36

2-2-2 طرز تهیهPBS   فاقد کلسیم و منیزیم (2/7 : PH) 37

2-2-3 طرز تهیه تریپسین/ EDTA. 37

2-2-4 روش جداسازی و کشت سلول­های بنیادی مغز استخوان. 39

2-2-5 پاساژ سلولی.. 39

2-3 تأیید هویت سلول‌های استرومایی به روش ایمونوسیتوشیمی.. 39

2-3-1 ایمونوسیتوشیمی CD71. 40

2-3-1-1 طرز تهیه پارافرمالدئید 4%. 41

2-3-1-2 طرز تهیه ژلاتین 1/0 درصد. 41

2-3-1-3 ساخت سرم بز 10%. 41

2-3-1-4 طرز تهیه PBS  ایمنوسیتوشیمی (4/7 – 2/7 = PH). 42

2-3-1-5 طرز تهیه بافر گلیسرول.. 42

2-3-2 رنگ آمیزی آلکالین فسفاتاز 43

2-4بررسی مارکر عصبی  βIII-tubulin در سلول‌های مزانشیمی مغز استخوان  به روش ایمونوسیتوشیمی.. 44

 2-5 تایید هویت عصبی نوروسفر­ها به روش ایمونوسیتوشیمی.. 45

2-6 بررسی مولکولی بیان ژن­های اعضای خانواده نوروتروفین.. 46

2-6-1 استخراج RNA کل از سلول‌های کشت شده 46

2-6-2بررسی کمی و کیفی RNA استخراج شده 48

2-6-3 الکتروفورز ژل آگارز 49

2-6-4 واکنش ساخت cDNA (واکنش رونویسی معکوسRT-) 52

2-6-5 انتخاب پرایمر. 53

2-6-6 آماده‌سازی پرایمرها 54

2-6-7 واکنش PCR. 54

2-7 آنالیز آماری.. 58

فصل سوم: نتایج… 59

3-1 مشاهده مورفولوژی سلول‌های مزانشیمی مغز استخوان در شرایط کشت با میکروسکوپ اینورت.. 59

3-2 تعیین هویت سلول‌های مزانشیمی مغز استخوان با نشانگر CD71 و آلکالین فسفاتاز. 60

3-3 ویژگی­های مورفولوژیکی سلول‌های مزانشیمی مغز استخوان بعد از کشت طولانی مدت.. 60

3-4 تأیید هویت سلول‌های عصبی با استفاده از روش ایمونوسیتوشیمی.. 60

3-5 تأیید هویت نوروسفر­ها با استفاده از نشانگر نستین.. 61

3-6 ارزیابی بیان ژن­های فاکتورهای نوروتروفیک و مارکرهای نورونی و بررسی آماری شدت باند­ها و نمودار­های مربوط به آن 61

4-1 نتیجه­گیری و بحث 70

4-1 مورفولوژی سلول­های بنیادی مزانشیمی در کشت طولانی مدت و تایید هویت آن­ها 71

4-2 بیان فاکتورهای رشد عصبی به وسیله سلول­های بنیادی مزانشیمی.. 72

4-3 پتانسیل تمایز سلول­های بنیادی مغز استخوان به سلول­های عصبی.. 74

4-4 تولید نوروسفر از سلول­های بنیادی مغز استخوان در کشت طولانی مدت.. 76

4-5 نتیجه گیری.. 77

پیشنهادات.. 77

مراجع  

برای دانلود پایان نامه اینجا کلیک کنید


نوشته شده در : شنبه 12 تیر 1395  توسط : مدیر سایت.    نظرات() .

levitra 10 mg prezzo
پنجشنبه 19 مهر 1397 01:11 ب.ظ

Thanks, I value it!
levitra 10 mg prezzo levitra 10 mg kopen buy levitra levitra online levitra 20 mg levitra levitra 20 mg bayer prezzo levitra levitra 20 mg vardenafil
buy generic cialis pills
سه شنبه 10 مهر 1397 07:47 ق.ظ

You actually suggested that really well.
generic cialis pro preis cialis 20mg schweiz purchase once a day cialis cialis sans ordonnance estudios de cialis genricos free cialis cialis online deutschland enter site natural cialis interactions for cialis cialis free trial
buy cialis with no prescription
یکشنبه 8 مهر 1397 04:45 ق.ظ

With thanks. Plenty of content!

buy cialis cheap 10 mg cialis dosage amounts click here cialis daily uk cialis great britain generic cialis tadalafil tadalafil tablets cialis sicuro in linea tadalafilo buy cheap cialis in uk tesco price cialis
buy cheap cialis in canada
شنبه 7 مهر 1397 02:08 ق.ظ

Effectively voiced of course! .
cialis diario compra cialis for sale south africa cialis coupons buy generic cialis cialis generique where cheapest cialis prescription doctor cialis cialis generisches kanada link for you cialis price prescription doctor cialis
rx from canada
شنبه 31 شهریور 1397 06:29 ب.ظ

You have made your point very clearly!.
canadianpharmacyusa24h is it legal canadian pharmaceuticals stocks canadian drug canada online pharmacies reviews canadian pharmacy king drugstore online canada best canadian pharmacies online canadian viagra canada online pharmacies surrey pharmacy canada online prescriptions
http://viagraky.com/
سه شنبه 27 شهریور 1397 04:55 ب.ظ

Great write ups. Regards!
cialis for sale in europa cialis rckenschmerzen acheter cialis meilleur pri cialis lilly tadalafi female cialis no prescription cuanto cuesta cialis yaho cialis kaufen bankberweisung callus opinioni cialis generico cialis super kamagra
canadianpharmacyonli.com
سه شنبه 13 شهریور 1397 09:23 ب.ظ

Good data, Regards!
drugs for sale usa canada rx pharmacy times buy viagrow buy vistagra online safe canada rx discount canadian pharmacies canadian medications pharmacy canada best canadian pharmacy no prescription
viagraky.com
سه شنبه 13 شهریور 1397 05:02 ق.ظ

Helpful posts. With thanks.
viagra online no prescriptions how can i order viagra online viagra uk buy online buy real viagra online without prescription generic viagra online uk herbal viagra buy viagra soft buy cheap viagra online with prescription buy viagra in china buy viagra sildenafil
Online cialis
دوشنبه 12 شهریور 1397 09:15 ب.ظ

Superb content, With thanks.
cialis generic availability cialis online napol cialis generico best generic drugs cialis cialis en mexico precio cialis rezeptfrei prezzo cialis a buon mercato il cialis quanto costa cialis 20 mg cost cialis italia gratis
http://cialisvu.com/
دوشنبه 12 شهریور 1397 03:01 ق.ظ

Kudos! Terrific information!
generic cialis at the pharmacy cialis vs viagra generic cialis buy cialis online recommended site cialis kanada cialis 5 mg schweiz purchase once a day cialis cialis dosage amounts cialis australia org buy cialis online nz
viagravipsale.com
یکشنبه 11 شهریور 1397 01:36 ب.ظ

Nicely put, Appreciate it.
cialis dose 30mg tadalafilo cialis generico online cialis side effects wow cialis 20 tadalafil 5mg generic for cialis wow look it cialis mexico cialis tablets for sale non 5 mg cialis generici
prices for viagra
سه شنبه 23 مرداد 1397 03:49 ق.ظ

Awesome forum posts. Regards.
how to get cheap viagra order viagra cheap is it illegal to buy viagra online viagra pharmacy viagra pharmacy prices how to buy viagra cheap buy real viagra online without prescription buy viagra super active how get viagra viagra pharmacy viagra
cialissi.com
دوشنبه 22 مرداد 1397 02:00 ب.ظ

Thank you, Ample posts!

5 mg cialis pharmacie en ligne side effects for cialis cialis generisches kanada low cost cialis 20mg cialis rckenschmerzen cialis cipla best buy the best choice cialis woman cialis 20mg preis cf generic for cialis generico cialis mexico
Cialis 20 mg
پنجشنبه 20 اردیبهشت 1397 05:14 ق.ظ

Truly quite a lot of terrific information!
cialis online cialis bula acquisto online cialis cialis in sconto estudios de cialis genricos cialis 20 mg best price ou acheter du cialis pas cher cialis 20 mg effectiveness callus dosagem ideal cialis
Cialis online
جمعه 7 اردیبهشت 1397 08:08 ب.ظ

You actually mentioned that superbly.
sialis canadian drugs generic cialis generic cialis 20mg tablets we recommend cialis best buy free generic cialis dosagem ideal cialis cialis pills price each buy online cialis 5mg cialis price thailand the best choice cialis woman
Generic for viagra
سه شنبه 4 اردیبهشت 1397 07:01 ق.ظ

Nicely put. With thanks!
rx pharmacy viagra where can i buy viagra without prescription sildenafil and viagra buy viagra no prescription online order viagra online without a prescription were to buy viagra cheapest viagra online pharmacy buy viagra with prescription online order online viagra generic viagra buy online
Buy generic cialis
جمعه 17 فروردین 1397 10:45 ب.ظ

Truly quite a lot of great info!
generic cialis levitra no prescription cialis cheap get cheap cialis canadian drugs generic cialis viagra vs cialis cialis tablets for sale canada discount drugs cialis tarif cialis france brand cialis generic cilas
Generic cialis
جمعه 3 فروردین 1397 08:35 ب.ظ

Cheers, Lots of facts!

cialis 20mg cialis tadalafil cialis 10mg prix pharmaci cialis patentablauf in deutschland trusted tabled cialis softabs buying cialis in colombia cialis canadian drugs sublingual cialis online cialis 5 mg para diabeticos we use it cialis online store
Buy cialis
دوشنبه 28 اسفند 1396 02:09 ق.ظ

Kudos. I like it!
buy online cialis 5mg how much does a cialis cost cialis price in bangalore sublingual cialis online acheter cialis kamagra cialis canadian drugs price cialis per pill cialis without a doctor's prescription click here take cialis viagra vs cialis
 
لبخندناراحتچشمک
نیشخندبغلسوال
قلبخجالتزبان
ماچتعجبعصبانی
عینکشیطانگریه
خندهقهقههخداحافظ
سبزقهرهورا
دستگلتفکر